1、分离定律的实质是：在杂合子细胞中，位于一对同源染色体上的等位基因具有一定的独立性；在减数分裂形成配子时，等位基因会随同源染色体的分开而分离，分别进入两个不同的配子中，独立地随配子遗传给后代。
2、孟德尔通过豌豆杂交实验发现了这一定律。他用纯种高茎豌豆与纯种矮茎豌豆杂交，子一代全为高茎；子一代自交后，子二代出现高茎与矮茎约3:1的分离比，从而提出控制性状的遗传因子成对存在，形成配子时彼此分离。
3、从细胞学角度看，杂合子中D和d等位基因位于一对同源染色体的相同位置上。减数第一次分裂后期，同源染色体彼此分离，D和d随之分开，分别进入两个子细胞，最终形成数量相等、含D或含d的两种配子。
4、由于受精时雌雄配子随机结合，子二代中便出现DD、Dd、dd三种基因型，比例1:2:1，表现型为高茎:矮茎=3:1。分离定律揭示了等位基因传递遵循减数分裂中同源染色体的行为规律。
5、该定律适用于真核生物细胞核遗传中一对相对性状的遗传，是有性生殖生物遗传的基本规律，也是理解遗传现象和进行育种实践的理论基础。
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